Qué es el HPLC?

Cromatografía Líquida de Alta Eficacia

Más Info: Sumi Scientific Instruments

La cromatografía líquida de alta eficacia o high performance liquid chromatography (HPLC) es un tipo de cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química analítica.

El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica. El objetivo principal de la cromatografía es separar y cuantificar la muestra de interés en la matriz.s

Principio

En la HPLC isocrática el compuesto pasa por la columna cromatográfica a través de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeñas partículas redondeadas con ciertas características químicas en su superficie) mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido de la columna se denomina tiempo de retención y se considera una propiedad identificativa característica de un compuesto en una determinada fase móvil y estacionaria. Los disolventes más utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo.

Componentes del HPLC

-Fase móvil: El líquido que mueve el soluto a través de la columna.
-Fase estacionaria: El material de relleno de la columna, que es la fase inmóvil relacionada al proceso cromatográfico.
-Bomba: utilizada para bombear la fase móvil a través del sistema.
-Inyector: modulo para introducir la muestra (matriz) al sistema.
-Columna: fase estacionaria.
-Pico: La representación visual en el cromatograma basado en la respuesta eléctrica del detector debido a la presencia de un compuesto de la muestra dentro de la célula de flujo.
-Tiempo de retención: Tiempo necesario para el pico del compuesto llegar al detector después de la inyección de la muestra.
-Cromatograma: Un diagrama de la señal del detector versus tiempo o volumen de elución.

HPLC i-series - Shimadzu.

Principales Industrias y Campo de aplicación de HPLC

Farmacéutico: Antibióticos, sedativos, esteroides, analgesias, drogas crudas, cosméticos, etc.
Bioquímico: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos, enzimas, medicinas, hormona, etc.
Alimentos: Micotoxinas, aditivos, sacáridos, azucares, amino ácidos, vitaminas, ácidos grasos, agentes colorantes, antibacterianos, etc.
Industria: Surfactantes, tinte, polímeros, agroquímicos, etc.
Química forense: Drogas, venenos, alcohol de la sangre, narcóticos, etc.
Ambiental: Iones inorgánicos, ácidos orgánicos, productos químicos agrícolas, pesticidas, herbicidas, fenoles, etc.
Medicina clínica: Ácidos de bilis, metabólicos de drogas, extractos de la orina, estrógenos, etc.